عملية فعالة ومنخفضة التكلفة للتصفية والترشيح الفائق للخميرة التي تعبر عن البروتينات المؤتلفة
لا يمكن لتعبير الخميرة عن الجينات الخارجية أن ينتج البروتينات والببتيدات المؤتلفة والأجسام المضادة واللقاحات والسيتوكينات وعوامل النمو والهرمونات وغيرها من المواد النشطة بيولوجيًا فحسب، بل يمكن استخدامه أيضًا لإنتاج الإنزيمات الصناعية والأغذية الوظيفية والمواد البيولوجية، والتي لها آفاق تطبيق واسعة. .
يشتمل نظام تعبير الخميرة على نظامين للتعبير شائع الاستخدام، وهما نظام تعبير خميرة الخميرة ونظام تعبير الخميرة الميثانوتروفي. نظام تعبير خميرة الميثانول هو نظام تعبير الخميرة الأكثر استخدامًا في الوقت الحاضر، وPichia هو الأكثر استخدامًا، والذي يمكنه استخدام الميثانول ككربون وطاقة. بالإضافة إلى ذلك، هناك خميرة هانسن، Sphaeroides وما إلى ذلك.
بغض النظر عن نوع نظام تعبير الخميرة، فإن عمليات الفصل والتنقية النهائية متشابهة، ويأخذ تدفق العملية المحددة تعبير الخميرة للبروتينات المؤتلفة وأدوية البولي ببتيد كمثال.
تتبنى أشرطة غشاء الترشيح الدقيق من Guidling قناة تدفق مفتوحة ووضع ترشيح التدفق العرضي، والذي يمكنه معالجة سائل التغذية المعقد بشكل فعال مثل سائل تخمير الخميرة وسائل تكسير E. coli بسرعة عالية، ويمكن أن يضمن التضخيم الخطي من الاختبار الصغير إلى نطاق الإنتاج. إن التصميم المعياري المدمج والاتصال البسيط بخطوط الأنابيب والاستقلالية وسهولة قراءة النظام يمكن أن يحمي المشغلين ويمنع التلوث البيولوجي. ولا يوجد التحقق من الصيانة والتنظيف. ولذلك، فهو مناسب جدًا لخطوة التوضيح الخاصة بالمعالجة النهائية المبكرة.
الغرض الرئيسي من عملية UF/DF هو إزالة الشوائب وإزاحة المخازن المؤقتة. تتميز كاسيت غشاء الترشيح الفائق Guidling بتجانس جيد لحجم مسام الغشاء ومحبة للماء القوية، والتي يمكن أن تعطي الغشاء تدفقًا أعلى وامتصاصًا أقل للبروتين، وتصميم قناة التدفق الأمثل، مع انخفاض ضغط أصغر، ونقل سهل للمواد وتقصير وقت الترشيح بشكل كبير. علاوة على ذلك، فإن سلسلة المنتجات كاملة ومرنة لتلبية احتياجات التطبيقات المختلفة بمقاييس مختلفة. ولذلك، فهو مناسب جدًا لخطوة UF/DF للمعالجة النهائية.
فيما يلي حالة تطبيق غشاء Guidlingكاسيتفي تعبير الخميرة عن البروتينات المؤتلفة.
توضيح الترشيح الدقيق
استخدمنا {{0}}.11 متر مربع كاسيت غشاء مسام 0.22 ميكرومتر لتنقية سائل تخمير الخميرة 1.5 لتر (الوزن الجزيئي للبروتين المستهدف 42-55 KD) عن طريق الترشيح الدقيق. في عملية الترشيح الدقيق برمتها، تم دراسة معدل استرداد البروتين المستهدف وتغير التعكر واستنفاد تدفق الغشاء.
0-17min هي عملية التركيز، 17-32min هي عملية الغسيل والترشيح. أثناء عملية الترشيح الدقيق بأكملها، زاد TMP تدريجيًا، وظلت سرعة دخول السائل دون تغيير، وكان متوسط تدفق المواد 45LMH.
كانت تعكر السائل 600NTU قبل الترشيح الدقيق و8NTU بعد الترشيح الدقيق، وتغيرت التعكر بشكل واضح.
أظهرت النتائج أن إنتاجية البروتين المستهدف كانت > 90%. تعتبر تقنية Guidling Technology 0.22μm كاسيت الغشاء مستقرة ومناسبة لسيناريو التطبيق هذا.
تركيز الترشيح الفائق
تم إجراء تركيز الترشيح الفائق لسائل مصفى سعة 1.5 لتر (الوزن الجزيئي للبروتين المستهدف 42-55 كيلو د) باستخدام 0.11 مترًا مربعًا من كاسيت غشاء 10 كيلو د. في عملية الترشيح الفائق برمتها، تم دراسة معدل استرداد البروتين المستهدف، واستنزاف تدفق الغشاء، ومعدل استرداد تدفق الماء.
قبل وبعد الاستخدام، يمكن أن يصل معدل استرداد الغشاء إلى 90%.
0-15min هي عملية التركيز، 15-18min هي عملية تبادل السوائل. أثناء عملية الترشيح الفائق بأكملها، زاد TMP تدريجيًا، وظلت سرعة دخول السائل دون تغيير، وكان متوسط تدفق المواد 50LMH.
وأظهرت النتائج أن البروتين المستهدف كان محصوراً بالكامل. يمكن تشغيل أشرطة الكاسيت الغشائية 10kd بتقنية Guidling بثبات وهي مناسبة لسيناريو التطبيق هذا.
لم يتم التعبير بشكل كبير عن معظم البروتينات المؤتلفة التي تعبر عنها الخميرة. من الواضح أن تعكر السائل المرشح انخفض وكان معدل استرداد البروتين أعلى. نظرًا لأن الوقت الكروماتوغرافي اللاحق طويل جدًا، فسوف يسبب تأثيرات ضارة على البروتين، ومن أجل تقصير وقت أخذ العينات الكروماتوغرافي، يمكن إضافة خطوة واحدة من تركيز الترشيح الفائق، ويمكن تركيز البروتين المستهدف بسرعة بعد العينة، مما يمكن تحقيق الغرض من توفير الوقت، وتقليل حجم الحشو وبالتالي تقليل تكلفة الإنتاج.
يمكن لأشرطة غشاء الترشيح الدقيق بتقنية Guidling عمومًا تقليل تعكر سائل التغذية إلى أقل من 20NTU، مما يلبي بشكل كامل احتياجات الترشيح الفائق واللوني اللاحق. سيختلف معدل استرداد الترشيح الفائق لأشرطة غشاء الترشيح الفائق باختلاف المواد، ويمكن أن يصل معدل الاسترداد العام إلى 90-95%.
ترحب بكم شركة Guidling Technology لطلب مجموعات اختبار للتقييم ذي الصلة.
حول جيدلينج
Guidling Technology هي مؤسسة وطنية ذات تقنية عالية تركز على المستحضرات الصيدلانية الحيوية وزراعة الخلايا وتنقية وتركيز الطب الحيوي والتشخيص والسوائل الصناعية. لقد نجحنا في تطوير أجهزة تصفية الطرد المركزي، وأشرطة الترشيح الفائق والترشيح الدقيق، ومرشح الفيروسات، ونظام TFF، ومرشح العمق، والألياف المجوفة، وما إلى ذلك. والتي تلبي تمامًا سيناريوهات تطبيق المستحضرات الصيدلانية الحيوية، وثقافة الخلايا، وما إلى ذلك. تُستخدم الأغشية والمرشحات الغشائية الخاصة بنا على نطاق واسع في التركيز والاستخلاص والفصل للترشيح المسبق والترشيح الدقيق والترشيح الفائق والترشيح النانوي. تلبي خطوط منتجاتنا العديدة، بدءًا من الترشيح المعملي الصغير ذو الاستخدام الواحد وحتى أنظمة ترشيح الإنتاج واختبار العقم والتخمير وزراعة الخلايا، احتياجات الاختبار والإنتاج. تتطلع شركة Guidling Technology إلى التعاون معك!