طريقة صيانة واستخدام أنبوب الترشيح الفائق

طريقة صيانة واستخدام أنبوب الترشيح الفائق

وظيفة أنبوب الترشيح الفائق:

1) التركيز. 2) التحلية. 3) استبدال المخزن المؤقت ؛ 4) له تأثير التنقية الجزئية.

1. يمكن استخدام أنبوب الترشيح الفائق الجديد مباشرة دون معالجة أخرى ؛

2. أنبوب الترشيح الفائق لا يمكن تعقيمه في درجة حرارة عالية.

3. معالجة أنبوب الترشيح الفائق عند تغيير البروتين المركز

يمكن إعادة استخدام أنبوب الترشيح الفائق. نقعه في 0. 1M NaOH لمدة ساعة إلى ساعتين ، ثم اغسله بالماء ، ثم اغسله بالمحلول المناسب (الماء المعقم أو PBS) على جهاز الطرد المركزي لمدة 3 مرات ، والذي يمكن استخدامه لتركيز البروتين الجديد ؛

4. معالجة أنبوب الترشيح الفائق الموضوع بشكل طبيعي

بالنسبة لأنبوب الترشيح الفائق الاستخدام بشكل متكرر ، ينقع في 0. 1M هيدروكسيد الصوديوم لمدة ساعة إلى ساعتين ، ثم اغسله بالماء وانقعه في ماء معقم. تأكد من إبقاء غشاء المرشح رطبًا ومنع البكتيريا من النمو ؛

5. علاج أنبوب الترشيح الفائق يوضع لفترة طويلة

إذا لم يتم استخدام أنبوب الترشيح الفائق لفترة طويلة ، فانقعه في 0. 1M NaOH لمدة ساعة إلى ساعتين ، اغسله بالماء ، وانقعه في 20٪ من الإيثانول للتخزين. تأكد من إبقاء غشاء المرشح رطبًا ومنع البكتيريا من النمو ؛

6. سرعة الطرد المركزي المستخدمة لأنبوب الترشيح الفائق

تبلغ سرعة الطرد المركزي بشكل عام 4000 دورة في الدقيقة (يوصى عمومًا بـ 3000 جرام ، والحد الأقصى لا يمكن أن يتجاوز 4000 جرام). بعد الطرد المركزي لمدة 5 - 8 دقائق ، يمكن تركيز عينة 4 مل إلى أقل من 1 مل إلى عشرات الميكرولتر ؛ إذا كانت السرعة عالية جدًا ، فسوف ينخفض ​​البروتين المستهدف ، مما يؤدي إلى فقدان البروتين المستهدف ؛ سرعة منخفضة ، تستغرق وقتًا طويلاً ، وكفاءة عمل منخفضة ؛

7. احتياطات عندما يمتد رأس البندقية إلى أنبوب الترشيح الفائق

عند إضافة محلول البروتين أو المخزن المؤقت لأنبوب الترشيح الفائق ، يمكن استخدام رأس المسدس الأزرق ؛ ومع ذلك ، عندما يتم امتصاص البروتين المستهدف المركز من قاع أنبوب الترشيح الفائق ، يجب استخدام رأس المسدس الأصفر ؛ عندما يتم إدخال رأس المسدس في أنبوب الترشيح الفائق ، يجب منعه من لمس غشاء المرشح لتجنب ثقب غشاء المرشح ؛

8. تقليل فقدان امتصاص البروتين لأنبوب الترشيح الفائق

يمكن أن يمتص غشاء أنبوب الترشيح الفائق البروتين ، مما يقلل البروتين المستهدف بنحو 30 في المائة ؛ من أجل تقليل فقد البروتين ، بعد امتصاص محلول البروتين المستهدف ، قم بتنظيف قاع أنبوب الترشيح الفائق باستخدام محلول البروتين لغسل معظم البروتين الذي يمتصه غشاء المرشح وتقليل فقد البروتين المستهدف ؛ إذا كان البروتين المنقى مركّزًا ، انتبه إلى أن الحجم المركّز يجب ألا يكون صغيرًا جدًا ؛ بشكل عام ، بغض النظر عن مدى الطرد المركزي ، سيتم الاحتفاظ بحوالي 200 لتر من محلول البروتين في القاع ؛

9. كيفية تحديد فشل أنبوب الترشيح الفائق

في ظل الاستخدام العادي ، عندما لا يتم ثقب غشاء المرشح ، لا يحتوي محلول البروتين المركز على بروتين أو تكون الكمية منخفضة جدًا (بما في ذلك البروتين المستهدف) ، بينما يحتوي المحلول الأول المرشح على البروتين المستهدف ، فهذا يشير إلى أن غشاء المرشح غير صالح و يحتاج إلى استبداله بأنبوب ترشيح فائق جديد.