عملية التنقية النهائية للقاح إسهال الخنازير

يعد الإسهال أحد الأمراض الثلاثة الرئيسية التي تسببت في خسائر اقتصادية كبيرة لصناعة الخنازير في الصين. هناك العديد من العوامل المسببة للإسهال في الخنازير، والعوامل الفيروسية هي الأكثر خطورة. يمكن أن تصاب الخنازير من جميع الأعمار، وخاصة الخنازير الرضيعة، ويمكن أن تصل نسبة الوفيات بعد الإصابة إلى أكثر من 50٪. ينتشر فيروس الإسهال الوبائي الخنازيري (PEDV) وفيروس التهاب المعدة والأمعاء الانتقالي الخنازيري (TGEV) على نطاق واسع في العالم، ويمكن أن يصاب الفيروسان منفردين أو مجتمعين. في الوقت الحالي، لا توجد أدوية محددة لعلاج PEDV وTGEV، والوقاية من إسهال الخنازير ومكافحته هي في المقام الأول لقاحات تجارية.

تشمل اللقاحات التقليدية للإسهال الوبائي الخنازير بشكل رئيسي اللقاح المعطل للفيروس بالكامل واللقاح الحي المضعف. سريريًا، يتم استخدام اللقاح المعطل الثلاثي PEDV وTGEV أو اللقاح المخفف، ولقاح PEDV وTGEV والفيروس الروتا الخنزيري الثلاثي المعطل أو اللقاح الموهن بشكل شائع، ومعظمهم من اللقاح الترادفي PEDV وTGEV.

في الوقت الحاضر، هناك العديد من اللقاحات ضد الإسهال الوبائي الخنازير في الصين.

تتشابه عملية إنتاج اللقاحات المعطلة والمضعفة، بما في ذلك بشكل رئيسي خمس خطوات لثقافة مسببات الأمراض، وتعطيل مسببات الأمراض أو تخفيفها، واستخلاص مسببات الأمراض وتنقيتها، وإعداد اللقاحات وتعبئتها، ومراقبة جودة اللقاحات. تقدم هذه المقالة بشكل رئيسي إجراءات تنقية مسببات الأمراض.

إيضاح

الغرض من التوضيح هو ضمان إزالة حطام الخلايا ومجموعات الجسيمات الكبيرة الأخرى. في إنتاج ثقافة الخلية مجموعة متنوعة من السم، بالإضافة إلى احتوائها على عدد كبير من جزيئات الفيروس، هناك العديد من حطام أنسجة الخلية والمنتجات الأيضية والشوائب الأخرى، مما يجعل السم في حالة غائمة أو شبه غائمة، المباشر سيؤدي استخدام عملية تركيز السم هذه إلى انسداد غشاء الترشيح الفائق قريبًا، ولا يمكنه إكمال تركيز السم، مما يؤدي إلى خردة غشاء الترشيح الفائق. لذلك، قبل أن يتم تركيز السم، يجب أولا تصفيته، وهو ما يتم عادة عن طريق الطرد المركزي منخفض السرعة والترشيح الغشائي. تجدر الإشارة إلى أنه عند استخدام تقنية فصل الغشاء، نظرًا لأن مادة الغشاء غالبًا ما تكون ذات سالبية كهربية أو مجموعات كارهة للماء، فمن الضروري التحقق مما إذا كانت مادة الغشاء تمتص جزيئات الفيروس.

تتطلب خطوة التوضيح الفعالة مزيجًا من القدرة العالية على إزالة الجسيمات الصلبة والإنتاجية العالية للمنتج، والتضخيم السهل، وحماية وحدات التشغيل اللاحقة. في الوقت الحاضر، يتم استخدام مرشح عميق لعملية التوضيح.

ومع ذلك، عندما يكون حجم الزراعة كبيرًا جدًا، ستكون هناك حاجة لعدد كبير من أغشية الترشيح العميقة، مما يؤدي إلى زيادة كبيرة في تكلفة المواد الاستهلاكية. وفي الوقت نفسه، فإن الكثافة العالية لثقافة الخلايا ستقلل من الحمل على غشاء المرشح العميق، مما يؤدي إلى زيادة التكاليف والتخفيف المفرط للمنتج.

تستخدم طريقة الترشيح الدقيق بشكل أساسي جهاز ترشيح التدفق العرضي، ومكونات الغشاء عبارة عن كاسيت غشاء مسطح وألياف مجوفة. يتم تشغيل ترشيح التدفق العرضي (TFF) بواسطة اختلاف ضغط الغشاء. تمر المواد والشوائب الأصغر من حجم مسام الغشاء عبر الغشاء، بينما يتم احتجاز الشوائب مثل الخلايا ذات الجزيئات الأكبر حجمًا. حجم مسام الغشاء المستخدم للترشيح الدقيق هو {{0}}.45/0.22μm. يمكن للترشيح الدقيق للتدفق العرضي للألياف المجوفة أن يعالج مباشرة سائل المحتوى الصلب العالي، مثل وسط زراعة الخلايا عالي الكثافة، ويمكن أن يزيل خطوات الطرد المركزي والترشيح المسبق بخطوات أقل وتشغيل بسيط، ويمكن استخدام الغشاء بشكل متكرر من خلال التنظيف، مما يقلل من استثمار المعدات وتشغيلها التكاليف، وذلك تمشيا مع متطلبات الإنتاج الآلي وحدات.

التركيز والتنقية

بعد التوضيح الأولي، لا يزال وسط زراعة الفيروس يحتوي على عدد كبير من الشوائب، بما في ذلك الجزيئات المعيبة، والقشرة الفيروسية، والسموم الخلوية، والوسط، وشظايا المصل والخلايا، وما إلى ذلك. إذا تم حقن هذه الشوائب في الحيوانات، فإنها لن تؤثر فقط على فعالية الدواء. اللقاح، ولكنه يسبب أيضًا استجابة مناعية قوية للمضيف، بل ويؤدي إلى موت الحيوانات المحصنة. لذلك، هناك حاجة إلى التركيز والتنقية لإزالة الشوائب مثل البروتينات غير المتجانسة وشظايا الخلايا، وتعزيز وتحفيز الاستجابات المناعية الفعالة، وتقليل كمية اللقاح المستخدم، وتقليل التفاعلات الضارة.

مبدأ تنقية الفيروس: الحفاظ على النشاط البيولوجي وعدوى الفيروس كمنطلق، وإزالة شوائب الفيروس واستخراج درجة نقاء الفيروس العالية.

في الوقت الحاضر، طرق التركيز والتنقية الرئيسية المستخدمة في الإنتاج على نطاق واسع هي الترشيح الفائق.

طريقة الترشيح الفائق، تستخدم بشكل أساسي جهاز الترشيح الفائق للتدفق العرضي، ونظام ترشيح الألياف المجوفة ومعدات الترشيح الأخرى، في ظل الظروف العادية، يمكن لتطبيق طريقة الترشيح الفائق أن يجعل الفيروس يركز أكثر من 100 مرة، ومعدل إزالة البروتين المتغاير يصل إلى 99٪. من بينها، تتميز تقنية الترشيح بغشاء الألياف المجوفة بمزايا قوة القص الخفيفة والمنخفضة، والتوصيل السهل، والتشغيل المرن، والعمر الطويل والتكلفة المنخفضة، وسهولة التضخيم، لذلك يوصى باختيار الألياف المجوفة لتركيز الفيروس وتنقيته.

عند استخدام طريقة الترشيح الفائق للتركيز والتنقية، من المهم جدًا تحديد حجم مسام الغشاء المناسب، والذي يحدد بشكل مباشر كفاءة وجودة التركيز. من ناحية، من الضروري تحديد فتحة الغشاء لاحتجاز الجزيئات المستهدفة بشكل فعال لضمان العائد، ومن ناحية أخرى، ينبغي النظر بشكل كامل في تأثير الإزالة وسرعة معالجة البروتينات المتغايرة. لذلك، فإن أفضل مبدأ هو اختيار الغشاء ذو ​​حجم المسام الأكبر الذي يمكنه احتجاز الجزيء المستهدف، ومحاولة اختيار غشاء المرشح مع توزيع موحد لحجم المسام.

فيروس الإسهال الوبائي الخنازير (PEDV) وفيروس التهاب المعدة والأمعاء الانتقالي (TGEV) كلاهما فيروسات تاجية، وهي عبارة عن كرات متعددة الأشكال، ذات نتوءات مقلوبة تشبه المسامير، يتراوح قطرها من 60 إلى 190 نانومتر. مرض فيروس الروتا هو مرض حيواني المنشأ، حيث يكون لفيروس الروتا (RV) مظهر يشبه العجلة ويبلغ قطره حوالي 70 نانومتر. يمكن بشكل عام اعتراض هذه الفيروسات الثلاثة باستخدام أغشية الترشيح الفائق ذات الفتحة 100-750kd.

Guidling Technology هي مؤسسة وطنية ذات تقنية عالية تركز على المستحضرات الصيدلانية الحيوية وزراعة الخلايا وتنقية وتركيز الطب الحيوي والتشخيص والسوائل الصناعية. لقد نجحنا في تطوير أجهزة تصفية الطرد المركزي، وأشرطة الترشيح الفائق والترشيح الدقيق، ومرشح الفيروسات، ونظام TFF، ومرشح العمق، والألياف المجوفة، وما إلى ذلك. والتي تلبي تمامًا سيناريوهات تطبيق المستحضرات الصيدلانية الحيوية، وثقافة الخلايا، وما إلى ذلك. تُستخدم الأغشية والمرشحات الغشائية الخاصة بنا على نطاق واسع في التركيز والاستخلاص والفصل للترشيح المسبق والترشيح الدقيق والترشيح الفائق والترشيح النانوي. تلبي خطوط منتجاتنا العديدة، بدءًا من الترشيح المعملي الصغير ذو الاستخدام الواحد وحتى أنظمة ترشيح الإنتاج واختبار العقم والتخمير وزراعة الخلايا والمزيد، احتياجات الاختبار والإنتاج. تتطلع شركة Guidling Technology إلى التعاون معك!