ملخص:

تستعرض هذه المقالة عاملين رئيسيين يجب مراعاتهما في استراتيجيات تنقية البروتين: متطلبات تطبيق المصب والخصائص البيولوجية للبروتينات نفسها. تؤكد المقالة أن تنقية البروتين عالية الجودة هي أساس موثوقية وتكرار البيانات التجريبية ، وخاصة لإنتاج البروتينات المؤتلف. سيناريوهات التطبيق المختلفة لها متطلبات محددة لنقاء البروتينات أو النشاط أو محتوى السموم الداخلية ، ويمكن أن تؤثر خصائص البروتينات على استراتيجيات التنقية بشكل كبير. وفقًا لحالات محددة ، توضح المقالة أن البروتينات الفريدة يجب أن تعتمد مخططات تنقية مخصصة. أخيرًا ، تم اقتراح عملية إنتاج البروتين المنهجية (الشكل 1) ، مع التركيز على مراقبة الجودة الكاملة من العملية من اختيار أنظمة التعبير ، وتصميم البناء إلى تحسين التنقية ، والتوصية بتقييم تجانس البروتين والوظائف من خلال التقنيات الفيزيائية الحيوية (مثل SEC-MALS ، DSF ، إلخ). تهدف هذه المقالة إلى توفير إرشادات عملية للباحثين ، ومساعدتهم على صياغة استراتيجيات تنقية فعالة وقابلة للتكرار بناءً على خصائص ومتطلبات التطبيق للبروتينات المستهدفة ، وبالتالي تعزيز جودة وكفاءة البحث العلمي.

 

الشكل 1. رسم تخطيطي لعملية إنتاج البروتين

 

إنتاج البروتين عالي الطلب - أمثلة على تحديد المشكلة ، وتصميم استراتيجية التخفيف والإخراج المقابل

 

1. حمض النوكليك ملزم بالبروتين:

عند تنقية بروتينات ربط الحمض النووي ، هناك حاجة إلى خطوات متعددة لإزالة تلوث الحمض النووي. أثناء التحلل ، يجب إضافة النيوكليز (مثل SM Nuclease (Benzonase®) أو DNase أو RNase) ، ولكن لا يمكن إزالة الأحماض النووية المرتبطة بالكامل. استبدل خطوات إزالة الحمض النووي ، مثل PEI أو ستربتومايسين كبريتات هطول الأمطار ، تنقية الهيبارين أو كروماتوجرافيا التبادل الأيوني. تمت مراقبة وجود الأحماض النووية بنسبة A26 0 nm/A28 0 nm خلال عملية التطهير. إذا كانت النسبة أقل من 0.6 ، فقد أشارت إلى أن نقاء البروتين كان مرتفعًا نسبيًا وأن تلوث الحمض النووي كان ضئيلًا. بالنسبة للبروتينات ذات الأحماض النووية المرتبطة بقوة ، يمكن تغيير طبانتها مؤقتًا (مثل المعالجة باليوريا) ثم إعادة تشويهها. النقاط الرئيسية: استخدم الكواشف عالية الجودة ، المخازن المؤقتة الطازجة والأعمدة النظيفة (نظيفة مع 0.5m NaOH قبل الاستخدام).

 

2. الماوس فيريتين السلسلة الثقيلة:

إن الغرض من إنتاج بروتين السلسلة الثقيلة للماوس المنقى (MFTH1) هو المجهر عالي الدقة من الجسيمات أحادية الجسيمات (Cryo-EM). تم تعطيل ناقل التعبير Escherichia coli المشفر MFTH1 غير المُصفح بالموجات فوق الصوتية دون إضافة أي نوكلياز. بعد التدفئة عند درجة 7 0 ، خضعت لخطوات كبريتات الأمونيوم ، والكلية ، واللوني استبعاد الحجم. أظهرت العينة الناتجة وجود كمية كبيرة من الملوثات في صور المجهر الإلكترون البري (الشكل 2A) ، والتي كانت غير مناسبة تمامًا لتطبيقها. تحسين الخطوات. أضف SM Nuclease أثناء عملية تحلل الخلية وعملية غسيل الكلى بعد هطول كبريتات الأمونيوم ، ثم أضف خطوة كروماتوجرافيا تبادل الأنيون لتقليل نسبة A26 0 nm/a280nm من 1.4 إلى 0.8. بعد كروماتوجرافيا استبعاد الحجم ، كانت نسبة A260NM/A280NM لعينة MFTH1 النهائية 0.56. أظهرت صور SDS-Page و Cryo-Electron Microscopy (الشكل 2B) أن البروتين كان نقيًا للغاية ، مما يشير إلى أن الملوثات قد تمت إزالتها بشكل فعال.

الشكل 2 الفأر فيريتين السلسلة الثقيلة

 

 

 

3. البروتين الوهمي DSRBEC (DSRBD-EGF- chimera):

يتكون DSRBEC من خلال اندماج مجال ربط الحمض النووي الريبي المزدوج (DSRBD) للبروتين البشري كيناز R وعامل نمو البشرة البشرية (HEGF). عندما يتم التعبير عن DSRBD في Escherichia coli ، فإنه يظهر قدرة الرنا الديمقراطي العالي للغاية. بعد تحلل الخلية ، سوف يعيق الحمض النووي الريبي القارب ربط البروتينات المؤتلف إلى عمود كروماتوجرافيا التقارب المعدني الثابت (IMAC). لا يمكن للطرق التقليدية مثل PEI أو هطول كبريتات الستربتومايسين أو علاج RNase أو حلول العازلة عالية الملح إزالة الحمض النووي الريبي. تم إجراء تحلل الخلية باستخدام مخزن مؤقت يحتوي على 4 أمتار اليوريا. تم تحميل الطاف على عمود IMAC ، وتم استخدام اليوريا 4M إلى {4}}} M اليوريا ببطء بين عشية وضحاها (إعادة تشكيل العمود). تمت إضافة المخزن المؤقت لإعادة التهاب مع إيميدازول وانتزع من عمود IMAC. تم تنفيذ التحسين النهائي من خلال ترشيح جل Superdex 75 للحصول على DSRBEC نشط وظيفيًا.

 

4. البروتينات المرتبطة بالكاتيونات الثنائية أو غيرها من العوامل المساعدة:

بالنسبة للبروتينات التي تتفاعل مع الكاتيونات الثنائيات مثل Zn 2+ ، Fe 2+ ، Cu 2+ ، أو العوامل المساعدة الأخرى ، من الأهمية بمكان إضافة كاتيونات ثنائية ثنائية (أو عوامل غير أخرى) أثناء التعبير. هناك حاجة أيضًا إلى كمية صغيرة من نفس الكاتيونات الثنائيات (أو العوامل المساعدة الأخرى) أثناء عملية التنقية. ومع ذلك ، يجب تجنب استخدام أي عوامل مخبأة (مثل EDTA ، EGTA) وعوامل التخفيض المخللة (مثل DTT أو DTE). عند التعامل مع البروتينات المرتبطة بالكاتيونات الثنائية ، يجب استخدام مزيج من مثبطات الأنزيم البروتيني بدون عوامل خلق لتأكيد الوجود الفعلي للكاتيونات الثنائيات (أو العوامل المساعدة الأخرى) في البروتين المنقى من خلال الطرق الطيفية (مثل قياس الطيف الذري).

 

5. Ferridoxin المؤتلف (RFD) يحتوي على مجموعة واحدة [2FE ± 2S]

Ferridoxin هو بروتين كبريت الحديد القابل للذوبان يشارك في تفاعلات نقل الإلكترون. يحمل Ferroredoxin من نوع النبات مجموعة واحدة [2FE ± 2S] كمقبض للإلكترون للنظام الضوئي الأول. أعربت سلالة Escherichia Coli BL21 (DE3) عن بروتين RFD المؤتلف في وسط TB الذي يحتوي على 10 مم FECL3 والمضادات الحيوية. تم إجراء شطف عمود الالتقاط IMAC باستخدام مخزن مؤقت يحتوي على 10 مم من الهستيدين لتجنب إيميدازول ومنع تدمير المجموعة [2FE ± 2S]. تم استخدام صرف الأنيون والاستبعاد الحجم لمزيد من التنقية والتركيز إلى 12mg/مل لفحص التبلور. بالمقارنة مع الإنتاج المؤتلف لـ Ferroredoxin ، حقق الطحالب الطبيعية التي تم تنقيتها من الطحالب الخضراء الزرقاء Mastigocladus laminosus دقة أعلى أثناء التبلور.

 

6. البروتينات المستخدمة كمستضدات

غالبًا ما تستخدم البروتينات كمستضدات لاستعادة بروابط خاصة بالهدف. أول شيء يجب مراعاته هو ما إذا كان يتم استخدام البروتين في المناعة في الجسم الحي للحصول على IgG أحادي النسيلة أو متعددة النسيلة ، أو للبرامج التي تنطوي على IgG الجمل أو في عمليات اختيار المختبر.

 

6.1 مستضدات تستخدم لإنتاج الأجسام المضادة الروتينية

عندما يتم استخدام المستضدات لإنتاج الأجسام المضادة IgG أحادية النسيلة ، فإن الطية الصحيحة للمستضد ليست ضرورية عادةً ، لأن معظم الأجسام المضادة أحادية النسيلة تتعرف على الحلقات الخطية التي لا تتأثر بشكل كبير ببنية المستضد ، وحتى المستضدات المشوهة (مثل بروتينات جسم الإدراج) لا تزال فعالة. ومع ذلك ، يجب التحكم في النقاء بصرامة لتجنب الملوثات المناعية القوية التي تتداخل مع الاستجابة المناعية وتسبب في هيمنة الأجسام المضادة غير المستهدفة.

 

6.2 فحص المكتبة المتقاربة

يجب إيلاء اهتمام خاص للحفاظ على التشكل الطبيعي للمستضد أثناء معالجة مكتبة الأجسام النانوية التي تم الحصول عليها عن طريق تحصين الجمل. على عكس الأجسام المضادة التقليدية ، تميل الأجسام المضادة للإبل (وخاصة الأجسام النانوية) إلى التعرف على الحلقات الهيكلية ، والتي ترتبط بهيكل الموقع التكميلي المحدب الفريد. وبالمثل ، عند فحص مكتبات الأجسام المضادة الاصطناعية أو الطبيعية الكبيرة في المختبر ، يجب على المستضد الحفاظ على هيكل يتماشى تمامًا مع التطبيق المستهدف. نظرًا لأن عملية الفحص نفسها غير متحيزة ، إذا كان المستضد قد خاطئ أو تجميع أو عدم تجانس التوافق ، فقد يتم فحص عدد كبير من المقترفين الذين يستهدفون الحلقات غير الطبيعية.

 

 

 

7. البروتينات التي تحتوي على روابط ثاني كبريتيد بين الجزيئات أو داخل الجزيئات أو السيستين الحرة

تعتبر روابط ثاني كبريتيد حاسمة لتثبيت التركيب الطبيعي للبروتينات. أثناء عملية التنقية ، عند تنقية البروتينات التي تحتوي على روابط ثاني كبريتيد بين الجزيئات أو داخل الجزيئات ، من الضروري تجنب إضافة عوامل تقليل لمنع التغيرات التوافقية للبروتينات ، وبالتالي تغيير وظائفها. بالنسبة للبروتينات التي تحتوي على السيستين الحرة ، لا غنى عن عوامل تقليل في جميع خطوات عملية التنقية ، وخاصة أثناء التخزين ، لمنع تكوين روابط ثاني كبريتيد الاصطناعية. العوامل الأكثر شيوعًا للتقليل هي dithiothreitol (DTT) ، -mercaptoethanol (-me) ، و tris (2- carboxyethyl) phosphine hydrochloride (tcep). بالنسبة لراتنجات IMAC التي لا تتوافق مع DTT أو TCEP ، يوصى باستخدام -Me واستبدالها بعوامل تخفيض أخرى في الخطوات اللاحقة.

 

8. جزء من الأجسام المضادة المؤتلف

على الرغم من أن بنية شظايا الأجسام المضادة المؤتلف (مثل الأجسام النانوية) أبسط من IgG ، فإن وظيفتها تعتمد على التكوين الصحيح لسندات ثاني كبريتيد. في أنظمة التعبير البكتيري ، حتى مع اعتماد استراتيجيات التحسين ، قد لا تزال المنتجات غير المطوية أو المطوية جزئيًا ، والتي توجد في الجزء القابل للذوبان وفي جسم التضمين. أكثر إخفاء هو أنه حتى شظايا الأجسام المضادة المطوية بشكل صحيح قد تشكل مجاميع قابلة للذوبان (التجميع الغروي) من خلال لويحات مسعور على السطح. يصعب تحديد مثل هذه المجاميع في الاختبارات الوظيفية الروتينية (مثل ELISA) لأن الربط متعدد التكافؤ قد يخفي الانخفاض في تقارب المونومر ، لكن وجودها يمكن أن يؤثر بشكل خطير على التطبيقات التي تعتمد على حجم الجزيء الصغير (مثل المجهر الفائق الدقة). لذلك ، فإن الاعتماد فقط على SDS-PAGE لا يكفي لتقييم جودة العينة. يجب اعتماد الطرق الفيزيائية الحيوية مثل ترشيح الهلام (الشكل 3) لتمييز المونومرات (القمم الرئيسية) من المجاميع (قمم حجم الاستبعاد). تشمل نقاط التحكم الرئيسية: تحسين بيئة الأكسدة أثناء التعبير لتعزيز تكوين رابطة ثاني كبريتيد ، وتحسين ظروف التخزين بعد التنقية لمنع التجميع. هذه التدابير حاسمة لضمان أحادي ووظيفة شظايا الأجسام المضادة.

الشكل 3. فصل ترشيح هلام المجاميع القابلة للذوبان من الأجسام النانوية

 

9. شظايا قابلة للذوبان من مستقبلات الخلايا اللمفاوية LLT1

غالبًا ما يواجه التعبير المؤتلف عن البروتينات التي تعتمد على رابطة ثاني كبريتيد (مثل مستقبلات الخلايا اللمفاوية LLT1) صعوبات قابلة للطي. أظهر ترشيح هلام من النوع البري من النوع LLT1 قمم التجميع والقمم الخافتة (الشكل 4A) ، لكن قياس الطيف الكتلي كشفت عن خاطئ بسبب السيستين غير المقيد في DIMER (الشكل 4B). لهذا الغرض ، تم تصميم اثنين من المسوخ: واحد إزالة المشكلة السيستين ، مما أدى إلى انخفاض مفاجئ في العائد (الشكل 4A) ؛ بعد إدخال Neocysteine ​​لإعادة بناء رابطة ثاني كبريتيد المطابقة ، لم يكن للطفر عائد عالي واستقرار جيد فحسب ، بل يمكن أن يتبلور أيضًا (الشكل 4C) ، وأكد البنية ثلاثية الأبعاد أن المسوخ شكل رابطة ثاني كبريتيد الصحيح والحفاظ على طي طبيعي. توضح هذه الحالة أنه من خلال تصميم روابط ثاني كبريتيد متطابقة بعقلانية ، جنبا إلى جنب مع ترشيح الهلام وتحليل الطيف الكتلي ، يمكن حل مشكلة طي البروتينات المؤتلف بشكل فعال ، ويمكن الحصول على البروتينات الوظيفية مع هياكل مستقرة والخصائص العالية.

الشكل 4. إعادة بناء رابطة ثاني كبريتيد يحسن طي وعائد LLT1 القابل للذوبان

 

 

 

10. البروتينات القابلة للتجميع بسهولة

غالبًا ما يواجه تنقية البروتينات المؤتلف مشكلة التجميع ، ويتبع تكوينه آلية "النمو النووي"-وهي كمية صغيرة من المجاميع القابلة للذوبان أولاً ثم تؤدي إلى تجميع غير قابل للذوبان على نطاق واسع. لمواجهة هذا التحدي ، يجب اعتماد استراتيجيات متعددة المستويات: في مرحلة التعبير ، يمكن تحقيق ذلك من خلال تحسين السلالة ، وتقليل درجة حرارة الثقافة ، وذلك باستخدام وسائط الثقافة المعدلة أو بروتينات الانصهار المختلفة ، واستبدال أنظمة التعبير (الخلايا المفرطة في الحشرات) ، وما إلى ذلك. يجب تبني imac to sec) لإزالة النوى الكلية. بشكل عام ، عند فحص حلول المخزن المؤقت ، يجب أن تؤخذ عوامل مثل تكوين المكونات ، وقيمة الرقم الهيدروجيني ، أو التفاصيل أو الذوبان في الاعتبار (الشكل 5). من خلال التحسين الدقيق للكشف المتعامد (مثل SEC ، CD ، LS ، DSF وتحول درجة الحرارة بناءً على حرارة مضان ، إلخ) ، تم تحديد جودة البروتين وحل العازلة الأنسب.

الشكل 5. استراتيجيات لتخفيف تجميع البروتين

 

11. تبلور كيناز CLK1 البشري (كيفية الحصول على دفعات قابلة للتكرار)

للحصول على كيناز CLK1 المتجانس غير الفسفوري لدراسات التبلور ، تم اعتماد مخطط تعاوني متعدد المجموعات. أولاً ، تم التعبير عن ذلك مع λ -phosphatase في الإشريكية القولونية للتخلص من عدم تجانس الفسفرة الذاتية. على الرغم من انخفاض العائد ، تم ضمان نزع الفسفرة الكاملة. بعد الاستيلاء على IMAC ، تم استكمال الشفط مع مثبتات (50 ملم أرجينين ، وحمض الجلوتاميك 50 مم و 10 ملم DTT) لمنع التجميع ، وتركيز ، وتمت إزالة العلامة له عن طريق هضم TEV. ثم ، تم فصل قلة القلة الصحيح بواسطة SEC (تحتوي على 5 ٪ الجلسرين و -Me). تميز خطوة تبادل الأنيون الحاسمة النهائية بين مجموعات CLK1 البلورية (غير الفوسفورية) وغير البلورية (فسفورية جزئيًا). تجدر الإشارة بشكل خاص إلى أن طريقة تحلل الخلية تؤثر بشكل كبير على استقرار البروتين-تؤدي طريقة الضغط العالي ودرجات الحرارة العالية إلى تجميع لا رجعة فيه لـ CLK1 ، مما يبرز أهمية العلاج المعتدل لإعداد كيناز.

 

 

 

12. إنتاج galectin -1 بقدرة ربط ligand مستقرة

لإعداد Galectin الوظيفي -1 لدراسات الربط يجند ، تمت مقارنة استراتيجيات التعبير والتنقية لأربعة بنيات (تم مقارنتها عن غاليكتين غير محفوظة وملفه من النوع البري. تشير النتائج الرئيسية إلى أن تنقية كروماتوجرافيا تقارب اللاكتوز يمكن أن تفحص بفعالية للبروتينات المطوية بشكل صحيح ، ولكن يجب دمجها مع غسيل الكلى الشامل (HEPES Buffer) لإزالة اللاكتوز تمامًا من موقع الربط واستعادة نشاط CRD. Galectin من النوع البري -1 عرضة للأكسدة والتعطيل ، ويظل استقراره محدودًا حتى في وجود عوامل تقليل (الشكل 6). ومع ذلك ، فإن متحولة خالية من السيستين يعزز بشكل كبير الاستقرار طويل الأجل مع الحفاظ على نشاط التراص المماثل والاستقرار الحراري (تم التحقق منه بواسطة nanodsf ، ITC ، إلخ) عن طريق القضاء على اعتماد رابطة ثاني كبريتيد.

الشكل 6. يكشف التوصيف الهيدروديناميكي لـ Galectin المؤتلف -1

 

13. إزالة السموم الداخلية

تعتمد طريقة إزالة السموم الداخلية على كروماتوجرافيا التقارب بما في ذلك كروماتوجرافيا مشحونة إيجابياً (تبادل الأنيون) ، واستخدام الروابط المتعددة (مثل poly-l-lysine (PLL) ، البوليامين المتجمد (polymyxin b)) ، وإضافة triton x -114. أثناء عملية التطهير ، انتبه إلى إعداد محلول المخزن المؤقت مع المياه الخالية من LPS ، واستخدم أعمدة أو أعمدة جديدة تم استخدامها فقط في تنقية أخرى خالية من LPS. لتلوث السموم الداخلية ، يمكن حضانة نظام المضخة/السائل الكروماتوغرافي بين عشية وضحاها في {5}}. 5m NaOH أو لمدة 4 ساعات في 1. تم تقييم الكمية النهائية من LPS في العينة باستخدام كاشف Limulus Amebocyte Lysate (LAL) ، وتم التحقق مما إذا كان أقل من الحد المطلوب للتطبيق المحدد.

 

14. مجمع البروتين

يجب تحسين التعبير وتنقية مجمعات البروتين وفقًا لظروف محددة. تشمل التحديات عدم الاستقرار أو الخاطئة للوحدات الفرعية. يمكن التعبير عن كل وحدة فرعية بشكل مستقل وتجميعها في المختبر ، أو معبرًا عن ذلك لتشكيل مجمعات البروتين الوظيفية. يجب إدخال تصميم البناء بعناية مع تسميات تنقية أو اكتشاف لتجنب التدخل في التجميع ، خاصةً عندما تكون المعلومات المعقدة محدودة وتتطلب تحسينات متعددة. أثناء عملية التطهير ، يجب تقييم سلامة واستقرار المجمع. تشمل الطرق SDS-PAGE (اكتشاف الوحدة الفرعية) ، SEC (التجانس) ، SEC-MALS (تحليل الكتلة المولي) ، قياس الضوئي الكتلي أو قياس الطيف الطبيعي (التحقق من الكتلة). تجدر الإشارة إلى أن المجمع قد ينفصل بتركيزات منخفضة. في هذا الوقت ، يجب تحسين طريقة الكروماتوغرافيا أو المخزن المؤقت (مثل ظروف فحص الانجراف الحراري أو DSF). علاوة على ذلك ، فإن تقليل خطوات التنقية يمكن أن يمنع فقدان الوحدات الفرعية للتفاعل الضعيف ويوازن بين كفاءة التنقية وسلامة المجمع.

 

 

 

15. تنقية مجمعات الأجسام المضادة للمستضد

مجمعات الأجسام المضادة للمستضدات هي أمثلة نموذجية لمجمعات البروتين. يمكن أن تكشف التثبيت المشترك الخاص بهم عن أنماط الربط وتوجيه تحسين هندسة الأجسام المضادة. تتطلب الطرق التقليدية تنقية منفصلة للمستضدات والأجسام المضادة ثم خلطها. ومع ذلك ، أظهرت الدراسات الحديثة أن استراتيجيات التعبير المشترك والتنظيم المشترك أكثر كفاءة. هناك حاجة إلى تنقية واحدة فقط للحصول على المجمع ، وفي الوقت نفسه ، يمكن تثبيت المستضدات غير المستقرة من خلال الأجسام المضادة ، ويمكن تحقيق حتى التعبير الخالي من الملصقات. في هذا الموقف المحدد ، عادةً ما تكون ترشيح SDS-PAGE والهلام (SEC) كافية لتقييم نقاء وجودة المجمع.

 

ملخص

تنقية البروتين هي تقنية أساسية في البحث العلمي. عادةً ما يتبع إنتاج البروتين الأكاديمي استراتيجيات قياسية ويمكن أن ينتج عن البروتينات العالية للذوبان على مستوى الملليغرام ، والتي تستخدم على نطاق واسع في البيولوجيا الهيكلية والكيمياء الحيوية والبحوث الوظيفية. ومع ذلك ، فإن المتطلبات الخاصة للتطبيقات المصب (مثل الحاجة إلى عدم وجود تسمم داخلي في التجارب الحيوانية وعدم تلوث النيوكليزي في أبحاث الحمض النووي) أو الخصائص المتأصلة للبروتينات (مثل التجميع السهل ، التي تحتوي على روابط ثاني كبريتيد أو تقارب الحمض النووي العالي) غالبًا ما تتطلب حلول مخصصة. تقترح هذه المراجعة ، استجابةً لهذه الظروف الخاصة ، الاستراتيجيات المكررة التي تتراوح من اختيار أنظمة التعبير ، وتصميم البنيات (تحسين الملصقات وحدود المجال) إلى عملية التنقية ، وتقدم مراقبة الجودة (مثل SEC ، SDS-PAGE ، الكشف عن النشاط ، وما إلى ذلك) في الخطوات الرئيسية. تتطلب بعض التطبيقات أيضًا تحليلًا إضافيًا (مثل اكتشاف السموم الداخلية وتحديد بقايا الأحماض النووية) ، على غرار مفهوم "ضمان الجودة" (QA) في صناعة المستحضرات الصيدلانية الحيوية ، أي منع العيوب من خلال العمليات المنهجية. من خلال صياغة إرشادات مراقبة الجودة وتوضيح معايير محددة لكواشف البروتين المستخدمة في البحث العلمي ، يتمثل الهدف في إنشاء معايير تنقية البروتين الأكثر صرامة للمختبرات الأكاديمية ، وتعزيز موثوقية وتكرار البيانات التجريبية ، وسد الفجوة بين البحث الأساسي والمعايير الصناعية.

 

doi: 10.1186/s 12934-022-01778-5